蟾酥對(duì)照品
化學(xué)成分及性質(zhì)
蟾酥為蟾蜍耳后腺及皮膚腺分泌的白色漿液，經(jīng)加工干燥而成，化學(xué)成分復(fù)雜，主要含蟾蜍甾二烯類，強(qiáng)心甾烯蟾毒類和吲哚堿類。蟾蜍甾二烯類又分為游離型和結(jié)合型。其游離型稱蟾毒配基，其結(jié)合型多為脂溶性的蟾酥毒素類、蟾酥配基類和精氨酸等結(jié)合的酯類。這類成分往往在干燥加工或提取過程中分解為蟾酥配基類。蟾酥中含有脂蟾毒配基、 華蟾毒精、 蟾毒靈、 蟾毒它靈、 遠(yuǎn)華蟾毒精及日蟾毒它靈等多種成分。
蟾酥及其制劑的含量測(cè)定方法很多，如分光光度法、薄層掃描法、差示光度法、高效液相色譜法和氣相色譜法等。
分光光度法
稱取蟾酥適量，置索氏提取器中，加氯仿回流提取 5 小時(shí)，揮干氯仿。殘?jiān)譃槎?，一份以乙醇溶解定容；另一份?4％ NaOH 溶液 2mL，并用乙醇稀釋至刻度，搖勻，室溫下放置 30 分鐘后于 360nm 分別測(cè)定兩份溶液的吸收度，計(jì)算△ A，由回歸方程計(jì)算含量。
取蟾酥約 0.5g，于 80℃干燥 2 小時(shí)，研成細(xì)粉，精密稱定，加海砂 5g，混勻，置索氏提取器中，加氯仿適量，提取4 小時(shí)，回收氯仿，殘留物加乙醇適量使溶解，濾過，濾液移至 100mL 量瓶中，用少量乙醇分?jǐn)?shù)次洗滌濾器，洗滌液并入量瓶中并加乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取 lmL置 25mL 量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，在 299nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按脂蟾毒配基 (C24H3204) 的吸收系數(shù) E ；蘭為 154 計(jì)算，即得。
薄層掃描法
薄層掃描法應(yīng)用較廣，常用硅膠 G 板，丙酮 - 氯仿 -環(huán)己烷展開系統(tǒng)，在 λS300nm，λR340nm 處進(jìn)行反射式鋸齒掃描。可測(cè)定脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈、蟾毒它靈、遠(yuǎn)華蟾毒精及日蟾毒它靈等多種成分。
氣相色譜法
用氣相色譜法測(cè)定蟾酥及其制劑的樣品需進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，如將樣品提取液先經(jīng)過柱層析或薄層層析后，方可進(jìn)行相色譜測(cè)定，采用 FID 檢測(cè)器，內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量。
高效液相色譜法
蟾酥中含有的蟾蜍笛二烯類、強(qiáng)心甾烯蟾毒類和吲哚堿類成分，都具有紫外吸收，可用高效液相色譜法測(cè)定。如《中
國藥典》2005 年版蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基就是用高效液相色譜法測(cè)定。